一、PCR實驗室布局

PCR實驗(yan)室原則上為試劑準備區(qu)、樣品制(zhi)備區(qu)(qu)(qu)(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)(qu)和(he)擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)產物(wu)分(fen)(fen)(fen)析區(qu)(qu)(qu)(qu)四個單(dan)獨的(de)工作(zuo)(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)域(yu)并設有專用走(zou)廊，各(ge)工作(zuo)(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)域(yu)應(ying)(ying)設緩(huan)沖間(jian)(jian)，工作(zuo)(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)與緩(huan)沖間(jian)(jian)宜安裝連(lian)鎖裝置。不同功(gong)能的(de)工作(zuo)(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)應(ying)(ying)是分(fen)(fen)(fen)隔獨立的(de)，各(ge)工作(zuo)(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)有明顯(xian)的(de)標志(zhi)，不能直通，如果(guo)緊密相連(lian)，需安裝物(wu)品傳遞窗。前(qian)(qian)兩區(qu)(qu)(qu)(qu)為擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)前(qian)(qian)區(qu)(qu)(qu)(qu)，后(hou)兩區(qu)(qu)(qu)(qu)為擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)后(hou)區(qu)(qu)(qu)(qu)，擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)前(qian)(qian)區(qu)(qu)(qu)(qu)與擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)后(hou)區(qu)(qu)(qu)(qu)應(ying)(ying)嚴格分(fen)(fen)(fen)開(kai)。實驗(yan)材料、試劑(ji)、記錄紙、筆、清潔材料等(deng)，只(zhi)能從擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)前(qian)(qian)區(qu)(qu)(qu)(qu)流(liu)向擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)后(hou)區(qu)(qu)(qu)(qu)，即從試劑(ji)準備區(qu)(qu)(qu)(qu)→樣品制(zhi)備區(qu)(qu)(qu)(qu)→擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)(qu)→擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)產物(wu)分(fen)(fen)(fen)析區(qu)(qu)(qu)(qu)，不得(de)逆向流(liu)動。實驗(yan)室的(de)氣流(liu)也(ye)應(ying)(ying)從擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)前(qian)(qian)區(qu)(qu)(qu)(qu)流(liu)向擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)后(hou)區(qu)(qu)(qu)(qu)，不得(de)逆向流(liu)動。各(ge)工作(zuo)(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)頂部應(ying)(ying)安裝紫外(wai)(wai)燈(deng)，紫外(wai)(wai)燈(deng)的(de)波長為254nm，每20㎡一(yi)支(zhi)40W的(de)紫外(wai)(wai)燈(deng)。

實驗室各區功能及主要設備

1、試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區(qu)：主(zhu)要進行(xing)試(shi)劑(ji)的制(zhi)備(bei)、分裝和主(zhu)反應(ying)混(hun)合液的制(zhi)備(bei)。試(shi)劑(ji)和用于樣(yang)品(pin)制(zhi)作的材料(liao)應(ying)直接運送至該(gai)區(qu)，不得經過其它區(qu)域。試(shi)劑(ji)原材料(liao)必須貯存(cun)在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)，并在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)制(zhi)備(bei)成(cheng)所(suo)需(xu)的試(shi)劑(ji)。本(ben)區(qu)主(zhu)要設備(bei)有(you)天平、冰箱(xiang)、離心機、加樣(yang)器(qi)、振蕩器(qi)等。

對于氣(qi)流(liu)壓力的(de)控(kong)制(zhi)，本區并沒(mei)有嚴格的(de)要求。

2、樣(yang)品(pin)制備區：主要進行(xing)樣(yang)品(pin)的保(bao)存(cun)、核酸(RNA、DNA)提取(qu)、貯存及其(qi)加入至擴增(zeng)反應管和(he)測定DNA的(de)合成(cheng)。本(ben)區主要設備有冰箱、生物安(an)全柜、離心機(ji)、加樣器、振蕩(dang)器、恒溫水浴等。

本區的(de)壓力(li)梯度要求為(wei)：相對于鄰(lin)近區域(yu)為(wei)正壓，以避免從(cong)鄰(lin)近區進入本區的(de)氣溶膠污染。

3、擴增區(qu)：主要進(jin)行DNA擴增。此外(wai)，已(yi)制備的(de)DNA模板(ban) (來自樣品制備區)的加入和主反應(ying)混合液(來自(zi)試劑準備區)制備成反應(ying)混合液等也(ye)可在本區(qu)內進行。本區(qu)主(zhu)要設備有：擴增(zeng)儀、冰箱、離心機(ji)、加樣器(qi)等。

本區的(de)壓(ya)力梯度(du)要求為(wei)：相對于鄰近區域為(wei)負壓(ya)，以避免(mian)氣(qi)溶膠從本區漏出。

4、擴(kuo)增產物分(fen)析區：擴(kuo)增產物的測(ce)定。本區主要設備有酶標(biao)儀、洗板機(ji)、加樣器和水浴箱等。

本區的壓(ya)力梯度(du)的要(yao)求為：相對(dui)于鄰近區域為負壓(ya)，以避免擴(kuo)增產物從(cong)本區擴(kuo)散至其它區域。

三、PCR實驗室通風系統及壓力控制

各區(qu)域之間應具備單向(xiang)的實驗(yan)工藝(yi)流(liu)(liu)、物流(liu)(liu)、人(ren)流(liu)(liu)與氣流(liu)(liu)，形成單向(xiang)流(liu)(liu)程的保護屏(ping)障，避免實驗(yan)之間的相互干擾，防止氣溶膠(jiao)擴散對實驗(yan)過程造成污染。

PCR實(shi)驗(yan)室并沒有(you)嚴(yan)格的(de)凈化要求，但是為避(bi)免各個(ge)實(shi)驗(yan)區(qu)域交叉污(wu)染的(de)可能性，宜采用全送(song)全排的(de)氣流組織形(xing)式，嚴(yan)格控制送(song)、排風的(de)比例以保證各實(shi)驗(yan)區(qu)的(de)壓力要求。

四、PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結構(gou)應牢固、氣密性好；所有陰陽角宜(yi)采(cai)用圓弧(hu)過渡；墻體內壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清(qing)洗消毒(du)；地(di)面使用PVC卷材(cai)或環(huan)氧(yang)樹脂自流坪，材(cai)料應(ying)滿足(zu)無縫隙、無滲(shen)漏、光潔、耐腐蝕的要求(qiu)。

五、PCR實驗室注意事項

1、幾(ji)個區(qu)域的大(da)小設置(zhi)情(qing)況，試劑準備區(qu)、擴增(zeng)區(qu)、擴增(zeng)產物分析區(qu)，空(kong)間可以(yi)相對小一些，樣品(pin)制備區(qu)要放置(zhi)生物安全柜和(he)低溫冰箱，空(kong)間應(ying)大(da)一些。

2、試(shi)劑準備區(qu)、樣(yang)品制備區(qu)設緊急(ji)洗眼器(qi)，以保證操(cao)作人員的安全。